Spectrofluorimetric determination of amlodipine in human plasma without derivatization

A rapid and sensitive spectrofluorimetric method was developed for the determination of amlodipine (AD), a calcium channel blocker, in the plasma. The type of solvent, the wavelength range, and the range of AD concentration were selected to optimize the experimental conditions. The calibration curves were linear (r² >0.997) in the concentration range of 0.1-12.5 ppm of AD. The limit of quantitation and limit of detection values for the method for plasma samples were 0.1 ppm and 0.07 ppm, respectively. The precision calculated as the relative standard deviation was less than 3.5%, and the accuracy (relative error) was better than 5.5% (n=6). The method developed in this study can be directly and easily applied for the determination of AD in the plasma without derivatization in plasma.

Método espectrofluorometrico rápido e sensível é descrito para a determinação de anlodipina (AD), um bloqueador de canais de cálcio, em amostras de plasma. O tipo de solvente, a faixa de comprimento de onda e a faixa de concentração foram escolhidas a fim de otimizar as condições experimentais. As curvas de calibração foram lineares (r > 0,997) na faixa de concentração de 0,1-12,5 ppm de AD. Os valores LoQ e LoD do método para amostras de plasma foram 0,1 ppm e 0,07 ppm, respectivamente. A precisão calculada como desvio padrão relativo (RSD) foi menor do que 3,5% e a precisão (erro relativo) foi melhor do que 5,5% (n=6). O método desenvolvido neste estudo pode ser fácil e diretamente aplicado para a determinação de AD sem derivatização no plasma.

Construção e caracterização de um sistema de imagens / Construction and characterization of a hyperspectral imaging system

O uso de interação da luz com a matéria não é um conceito novo em biologia para a detecção de processos físico-químicos, embora ainda seja utilizado de uma forma rudimentar. Já é sabido que imagens de refletância e fluorescência podem revelar informações importantes sobre tais processos em amostras biológicas. Apesar deste potencial, os sistemas experimentais disponíveis para a obtenção de tais imagens costumam serem complexos e de difícil implementação. Neste trabalho é descrita a construção e a caracterização de uma montagem experimental para produção de imagens hiperespectrais entre 400 e 1.000 nm. O sistema é composto de um espectrômetro, um conjunto de lentes para formação da imagem e uma câmera CCD para capturá-la. São descritos em detalhes o procedimento de calibração do sistema, o qual envolve os parâmetros largura da imagem, campo de visão, resolução espectral e espacial. O sistema de iluminação utiliza diodos emissores de luz de alta potência, tanto de luz branca quanto em 470 e 405 nm. Demonstramos que o sistema construído é capaz de obter imagens de fluorescência e/ou refletância de amostras biológicas. Como exemplos de aplicações, o instrumento aqui desenvolvido foi utilizado em dois campos distintos, a agricultura e a odontologia. Foram obtidas imagens de fluorescência de folhas de citros contaminadas com cancro cítrico, e de processos de desmineralização em dentes. Os resultados demonstram que o sistema construído está operando como projetado.

The use of light-mater interaction for the detection of chemicalphysical processes is not a new concept in biology, though it is still used in a rudimentary form. It is already known that reflectance as well as fluorescence images can reveal important information on such processes in biological samples. In spite of this potential, the experimental available image systems usually are complexes and of difficult implementation. In this work, we describe the construction and characterization of an experimental device to produce hyperspectral images between 400 and 1,000 nm. The system is composed of a spectrometer, a set of lenses for image formation and a CCD camera to capture it. We describe in details also the calibration procedure of the system, which involves parameters as image width, field of view, spectral and space resolution. The illumination system uses high power light emitting diodes, either at white light or at 470 and 405 nm. We demonstrate that our system is able to obtain reflectance as well as fluorescence images of biological samples. As examples of applications, we use it into two different fields, agriculture and dentistry. We obtained fluorescence images of citrus leaves contaminated with citrus canker and demineralization processes in teeth. Our results demonstrate that our system isoperating as designed.

Perspectives on in vitro fungal diagnosis with UV light

O aumento na incidência de infecções fúngicas e a crescente habilidade dos organismos em adquirirem resistência a tratamentos antimicrobiais tornam necessária a introdução de métodos de identificação rápida de fungos e bactérias. Em dermatologia, técnicas ópticas que exploram luz ultravioleta, como o método de Wood, apresentam-se como importantes ferramentas para o diagnóstico clínico de infecções dermatológicas. Neste trabalho são exploradas técnicas de espectroscopia óptica por fluorescência na identificação de fungos. O método aplicado utiliza diferentes fontes de luz ultravioleta (lâmpada, LED, Laser) para excitar opticamente cromóforos de alguns de fungos (in vitro). Seis espécies de fungos (Microsporum gypseum, Microsporum canis, Trichophyton schoenleinii, Trichophyton rubrum, Epidermophyton floccosum e Fusarium solani) foram investigadas. Os resultados obtidos demonstram que algumas das limitações no diagnóstico de fungos com lâmpada de Wood podem ser superadas utilizando análises espectroscópicas refinadas. A largura espectral e o comprimento de onda de pico da fluorescência emitida pelos fungos são parâmetros que podem ser usados na distinção de microorganismos de espécies diferentes. Foi verificado também que, com a excitação óptica de fungos por LEDs, a luz emitida pelos microorganismos apresenta as mesmas características espectrais da fluorescência obtida com a excitação por uma lâmpada de Wood. Os resultados aqui apresentados indicam a possibilidade do uso de LEDs e LASERs no diagnóstico clínico de infecções fúngicas.

Detecção de lesões neoplásicas induzidas em mucosa oral de hamster utilizando espectroscopia de fluorescência / Detection of induced neoplastic lesions in the oral mucosa of hamsters using fluorescence spectroscopy

OBJETIVO: Este trabalho teve por objetivo a utilização da técnica de espectroscopia de fluorescência induzida por laser para a caracterização de tecido normal e neoplásico em mucosa jugal de hamster, visando diagnosticar tecidos neoplásicos in vivo. MÉTODOS: O carcinógeno DMBA foi aplicado na bochecha direita de 31 hamsters com 150 ± 10g, três vezes por semana durante 12 semanas. Um animal foi mantido como controle (sem aplicação da droga). Após este período, os animais foram submetidos à espectroscopia de fluorescência induzida por laser de argônio (488nm), acoplado a um cabo de fibras ópticas. A autofluorescência do tecido foi guiada pelo cabo de fibras e analisada por um espectrógrafo e uma câmera CCD 1024X256 pixels, cobrindo a faixa espectral de 550nm a 700nm. Os espectros foram coletados na área da lesão induzida e na bochecha contralateral (normal) de todos os animais, além do animal de controle. Subseqüente à espectroscopia, foi realizada a biópsia da lesão para a análise histopatológica. Dois algoritmos de diagnóstico dos espectros de tecido neoplásico, baseados na razão entre regiões espectrais e na técnica de análise das componentes principais (PCA) foram implementados. RESULTADOS: Foi demonstrada a existência de um pico intenso na região de 630nm nos tecidos neoplásicos (atribuído à protoporfirina IX), quando comparados com o tecido normal. O algoritmo baseado na razão entre regiões espectrais obteve 100 por cento de sensibilidade e especificidade. O algoritmo baseado na PCA obteve 94 por cento e 100 por cento de sensibilidade e especificidade, respectivamente. CONCLUSÕES: Este trabalho indica que a autofluorescência de tecidos da mucosa oral poderá ser utilizada como uma técnica não-invasiva de diagnóstico, com alta sensibilidade e especificidade.

Spectrophotometric and spetrofluorimetric methods for determination of rutin in presence of ascorbic acid

Two simple, sensitive and specific methods for the determination of rutin in tablets in presence of ascorbic acid are presented. The first method depends upon measuring the first derivative response of rutin in methanolic/NaOH solution at 430 nm, where ascorbic acid showed no interference. The second method utilized the fluorescence characteristics of rutin/AlCl3 complex in methanol, where ascorbic acid has no contribution. The validity of the proposed methods was proved by analysis of synthetic mixtures of rutin and ascorbic acid and have been applied successfully to the analysis of rutin in tablets